1)噬菌體DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是zui常用的表達菌株，噬菌體DE3是λ噬菌體的衍生株，構建好的表達載體可以直接轉入表達菌株中，誘導蛋白的表達方式與lac啟動子一樣都是iptg誘導。

2)表達菌株BL21(DE3)上帶有lacI基因，T7 RNA 聚合酶編碼基因以及lacUV5啟動子，lacUV5啟動子可以啟動T7 RNA 聚合酶的表達;

3)表達質粒如pET-28質粒帶有T7啟動子和編碼阻遏蛋白lacI的基因，在插入目的基因后，lacI是失活的;

4)在非誘導條件下，表達菌株中表達出的lacI阻遏蛋白可以作用于T7 RNA 聚合酶前的lacUV5啟動子，從而抑制T7 RNA 聚合酶的表達。IPTG是乳糖類似物，可以與阻遏蛋白lacI結合，使其對lacUV5啟動子失去阻遏作用，T7 RNA 聚合酶得以合成，繼而與pET-28質粒上的T7啟動子結合，啟動下游基因包括目的基因的表達，從而產生目的蛋白。

需要注意的是：

由于T7 RNA 聚合酶的調控方式仍可能有痕量的本底表達，控制基礎表達的手段之一是培養基外加葡萄糖，有助于控制本底表達水平。

二是采用帶有T7 lac啟動子的載體——這些質粒在緊鄰T7啟動子的下游有一個lac操縱子序列。它們同樣帶有常規啟動子以及編碼lacI阻遏蛋白的序列，T7lac和 lacI啟動子位置交錯。采用這種載體及DE3溶原菌，lac阻遏蛋白既可以作用于宿主染色體lacUV5 啟動子，抑制宿主聚合酶轉錄T7 RNA聚合酶，也可以作用于載體T7lac 啟動子，從而阻斷任何 T7 RNA聚合酶導致的目的基因轉錄。普通 T7 啟動子和 T7 lac 啟動子的區別在于蛋白表達的嚴緊性不同。T7 lac啟動子在啟動子區下游 17bp 處含有一個 25bp 的 lac 操縱序列，屬于高嚴緊性的啟動子。該位點結合lac阻遏蛋白能夠有效降低 T7 RNA 聚合酶的轉錄。而普通的 T7 啟動子表達量更高些。

如果這還不夠，更為嚴謹調控手段還有在宿主菌中表達另一個可以結合并抑制T7 RNA 聚合酶的基因——T7溶菌酶，降低本底表達。常用的帶溶菌酶質粒有pLysS和pLysE，相容的ori都不會影響后繼的表達質粒轉化，前者表達的溶菌酶的水平要比后者低得多，對細胞生長影響小，而pLysE會明顯降低宿主菌的生長水平，容易出現過度調節，增加蛋白表達的滯后時間，從而降低表達水平。

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