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小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒太給力了

更新時間:2017-06-28      瀏覽次數(shù):1112

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒簡介

轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)是指兩類多肽類生長因子,轉(zhuǎn)化生長因子-α和轉(zhuǎn)化生長因子-β。轉(zhuǎn)化生長因子-α是由巨噬細(xì)胞,腦細(xì)胞和表皮細(xì)胞產(chǎn)生,可誘導(dǎo)上皮發(fā)育。人類轉(zhuǎn)化生長因子-β有三個亞型,TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3。轉(zhuǎn)化生長因子-β (Transforming growth factor beta, TGF-β)是一多功能蛋白質(zhì),可以影響多種細(xì)胞的生長,分化、細(xì)胞凋亡及免疫調(diào)節(jié)等功能。轉(zhuǎn)化生長因子-β屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β超家族蛋白。轉(zhuǎn)化生長因子-β可以結(jié)合到細(xì)胞表面的轉(zhuǎn)化生長因子-β受體結(jié)合而激活其受體。轉(zhuǎn)化生長因子-β受體是絲氨酸/蘇氨酸激酶受體。其信號傳遞可以通過SMAD信號通路和/或DAXX信號通路。

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)elisa試劑盒檢測中實驗條件的選擇 

在ELISA中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

  (1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

  (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。

  (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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