信帆生物帶你了解磁珠法DNA 提取試劑盒

動物組織基因組 DNA 提取試劑盒（磁珠法）說明書

規(guī)格：50T

保存：磁珠可以在室溫下（ 15-25℃）運輸，但請在 4℃冰箱中保存，禁止凍存。蛋白酶 K 需-20℃保存，以保證其活性。其余試劑可以室溫保存，更長時間的保存可置于 2-8℃。復檢期 1 年。

產(chǎn)品說明：

本試劑盒采用具有*分離作用的磁珠和緩沖液系統(tǒng)，可從樣品中分離純化高質(zhì)量基因組DNA。特殊包被的磁珠在一定條件下對目的 DNA 具有很強的親和力，而當條件改變時，磁珠釋放吸附的 DNA，能夠達到快速分離純化 DNA 的目的。整個過程安全、便捷，提取的 DNA 純度高。使用本試劑盒純化的基因組 DNA 的 OD260/OD280 均在 1.7-1.9 之間，可以應用于各類下游分子生物學實驗。使用前請先在漂洗液中配置 70%乙醇。若裂解液產(chǎn)生沉淀，使用前應將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在 37℃水浴中預熱 10min 溶解沉淀，搖勻后使用。

操作步驟：

1. 裂解

取適量的動物組織樣本（脾臟≤20 mg；肺臟≤20 mg；腎臟≤20 mg；）用液氮研磨成粉末，并迅速轉(zhuǎn)移到已加入480μl 裂解液S1、150μl裂解液S2以及20μL蛋白酶K（20 mg/mL）的EP管中，吹打或震蕩混合均勻。將EP管置于65℃水浴25～30min。待冷卻到室溫，12000rpm 4℃離心5-10min。

2. 結合

盡量取凈上清于新的1.5 mL EP管中，加入等體積的異丙醇以及振蕩混勻的50μL磁珠，顛倒混勻1 min，靜置3 min。將EP管置于磁鐵上進行磁分離，吸棄廢液（吸凈管蓋及管底殘液）。

3. 洗滌

加入600 μL 漂洗液（使用前請預先配置70%乙醇），輕柔混勻1-2 min，將EP管置于磁力架上進行磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液；重復本步驟一次。

4. 洗脫

室溫晾干5～10 min至乙醇揮發(fā)*，加入50～100 μL洗脫液，緩慢抽吸混勻，65℃水浴10 min。（每隔1～2 min輕搖EP管幾下混勻）。將EP管置于磁力架上進行磁分離，小心吸取上清液至新的EP管中，進行下游實驗。（判斷磁珠晾干的標準：側(cè)面觀察磁珠無反光，正面觀察磁珠邊緣龜裂）

信帆生物帶你了解磁珠法DNA 提取試劑盒

注意事項:

1. 動物組織（脾、肺、腎）要用液氮充分研磨。

2. 整個裂解過程操作盡量溫和，并在要求時間內(nèi)完成。

3. 如果組織液濃度較高，則建議磁珠量可適當增加，以獲取高濃度 DNA。

4. 客戶自備試劑：異丙醇、無水乙醇、蛋白酶 K。

5. 使用前請在漂洗液瓶中預先配制 70%乙醇。

6. 磁珠在使用前一定要充分混勻。
 

常見問題及參考意見：

1. 得率低

（1）組織沒有*裂解完，裂解時間不夠或沒有離心直接進行下一步操作：可適當延長裂解時間，zui長不超過60 min。樣品裂解后，請一定要離心后再進行下一步操作。

（2）結合不充分：結合過程中要使磁珠一直處于懸浮狀態(tài)，并且充分顛倒混勻。

（3）取樣量大于說明書給出量：取樣量請嚴格按照說明書操作。

2. 條帶彌散

（1）樣品不新鮮或反復凍融多次：盡量用新鮮樣品進行實驗，如果樣品需要保存，可根據(jù)實驗，分裝保存樣品，盡量避免反復凍融；

（2）環(huán)境溫度太高：可以將研缽置于-20℃預冷或置于液氮保存后再進行研磨，如果所提取材料基因組DNA極易降解，可用液氮研磨；

（3）裂解時間太長：裂解時間不要超過60 min；

（4）提取后模板DNA放置時間太長：提取后如有需要，請盡量及時進行凝膠電泳實驗。短期內(nèi)可置于4℃保存，長期請置于-20℃保存（盡量注意避免反復凍融）。

3. DNA液有顏色

（1）洗滌過程不充分：如果結合后磁珠呈團狀、 絲狀或顆粒狀，可增加點陣力度及次數(shù)，充分吹打混勻。

（2）裂解不充分：適當增加裂解液S1和S2用量，也可以延長裂解時間。

（3）樣品用量大于說明書給出量而其他試劑用量沒有相應調(diào)整：嚴格按照說明書操作，如果需要增大樣本量，可以等比例增加裂解液S1、S2以及磁珠用量，其他試劑用量不變。

4. DNA樣品不純，干擾后續(xù)實驗

（1）DNA液有乙醇殘留：洗滌時，請注意吸凈管蓋及管底的殘液。此外，磁珠應*干燥，保證無乙醇殘留。

（2）磁珠洗滌不充分：加入70%乙醇溶液時，請吸打或點陣混勻。如有必要，可增加一次洗滌步驟。

（3）DNA液中吸入磁珠：如果不小心吸入磁珠，請將上清液返回原管，待磁珠*吸附至管壁后重新吸取上清。或者將吸取的上清液10000 rpm離心2 min，再取上清。

（4）DNA液中含有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)：建議適當減少樣品用量。或可重復一次提取過程去除雜質(zhì)。

（5）DNA液中含有輕微鹽離子等雜質(zhì)，此為洗脫液（含有抑制核酸降解的成分）正常現(xiàn)象，不影響實驗，可將獲得的DNA置于-20℃環(huán)境分裝保存。

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