明膠酶譜法分析試劑盒多可以檢測多少個樣本！


產品簡介：
基質金屬蛋白酶（MMP）明膠酶譜法試劑盒操作簡單，靈敏度高。南京信帆生物供應的MMP試劑盒采用酶譜法（zymography）檢測 MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達 1 nM，高于 ELISA 方法,而且可檢測幾百個樣本。
 

基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解 細胞外基質的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細胞外基質，膠原酶參與胚胎發育、形態發生、組 織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經等許多疾病過程。血漿與組織中的 MMP-2、MMP-9 參與各種生理與病理過程，其在臨床診斷和治療中的意義日益受到重視  。

本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測 MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電 泳， 電泳結束后取出凝膠與酶反應 Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮區域，從而能同時指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。

本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應緩沖液，可檢測少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性，檢 測靈敏度~1 nM。試劑盒可進行 50 次標準小膠檢測，如果小膠加樣孔為 10~15個，則總計可檢測 500~750 個樣品。
 

明膠酶譜法分析試劑盒多可以檢測多少個樣本！

染色步驟：

1. 此染色液即為工作液，使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養皿中以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝 膠，并緩慢搖動 2h；

2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；

3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動 2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進行脫色，直至獲得清晰的 藍色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要 2～4h，也可脫色過一夜至清晰的藍色的條帶和干凈 的背景）；

4. 對凝膠進行分析和照相，凝膠可放置在    7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對 凝膠進行處理后保存。

需要注意的問題：含有甲醇，無特殊毒性，按一般化學品操作規程處理。

說明：

1. 染色液配方：0.25g 考馬斯亮藍 R250 420ml 甲醇 100ml 冰乙酸，定容至 1000ml，混合 1h 后用 Whatman 1 號濾紙過濾，于室溫可無限期保存；

2. 脫色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

3. 保存液：7％冰醋酸；

4. 凝膠染色之后，染色液可以回收利用，裝入新容器內，室溫或 4 ºC 保存，可反復使用 2-4 次。

明膠酶譜法分析試劑盒多可以檢測多少個樣本！