人白細胞介素8(IL-8)elisa試劑盒關于標本的采集和保存

1、細胞來源：il-8主要由單核－巨噬細胞產生；其他如成纖維細胞、上皮細胞、內皮細胞、肝細胞等亦可在適宜的刺激條件下產生il-8。

il-8的分子量約8kd，主要活性形式為72個氨基酸。il-8的氨基酸順序與許多炎癥因子有較高的同源性，屬于同一個家族；現初步證實il-8家族（亦稱pf4家族）至少有12個成員。il-8可以分成α和β亞群，α亞群的基因位于第4號染色體上，β亞群的基因位于第17號染色體上。il-8的受體也有兩型：一種只能與il-8結合，而另一種還能結合其它的趨化因子；中性粒細胞和嗜堿性粒細胞表面均表達豐富的il-8受體。

2、主要生物學活性：吸引和激活中性粒細胞，曾被命名為中性粒細胞激活肽（naf）、粒細胞趨化肽（gcp）、中性粒細胞激活因子（naf）等。中性粒細胞與il-8接觸后發生形態變化，定向游走到反應部位并釋放一系列活性產物；這些作用可導致機體局部的炎癥反應，達到殺菌和細胞損傷的目的。此外il-8對嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和淋巴細胞也有一定作用。

標本的采集和保存

ELISA試驗所用標本主要為血清，也可以用經過預處理的唾液、尿液、糞便等生物材料。患者標本可能含有干擾試驗的免疫物質，導致假陽性或者假陰性的結果，干擾因素一般可分為兩類，即內源性和外源性干擾因素。內源性干擾因素包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白等，避免內源性干擾因素主要通過選擇合理的試劑。外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、儲存時間過長及標本凝固等。在血液采集和運輸過程時，應注意避免溶血。否則，紅細胞溶解時會釋放出血紅蛋白，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶活性的物質，在以HRP為標記的ELISA試驗測定中，可能會增加非特異性顯色而出現假陽性結果。血清標本適宜在新鮮時檢測，若推遲檢測需將標本低溫保存。一般說來，在7天內檢測的血清標本，可放置于2℃~8℃保存，超過1周檢測的需低溫冰存。因反復冰融會使抗體效價降低，所以，對需要保存做多次抗體測定的血清標本，應少量分裝并冰存。血清標本應充分離心，否則可因殘留的纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結果。

加樣操作中，依次有3次加樣，即加標本、加酶結合物、加底物。加標本一般采用手工加樣或者加樣器。手工加樣每次必須更換吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在實際操作中揣摩使用技巧，避免吸樣量過多或過少。加樣器在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內附著的血痂等原因造成加樣不準，因此必須定期對加樣器進行維護和校準。加酶結合物和底物一般可直接滴加。每次加樣時，應將所加物置于ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，注意不可濺出，不能產生氣泡，加酶試劑后要用吸水紙在酶標板上輕輕擦拭吸干。加底物操作時應注意各試劑盒顯色劑不能混用，添加順序不能顛倒，不能濺出孔外。標本較多時，需要分批操作，以免加樣板過多，造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(尤其是在室溫較高時)。最后，在微型振蕩器上震蕩lmin，以保證混勻。

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