原位雜交實驗的注意事項
組織取材 。組織取材應盡可能新鮮。
增強組織的通透性和核酸探針的穿透性 。去污劑處理：最常應用的去污劑是Triton X-100，注意過度去污劑處理不僅影響組織的形態結構，而且還會引起靶核酸的丟失。蛋白酶處理：蛋白酶消化能使經固定后被遮蔽的靶核酸暴露，以增加探針對靶核酸的可及性。
雜交緩沖液孵育 。雜交前用不含探針的雜交緩沖液在雜交溫度下孵育2h，以阻斷玻片和標本中可能與探針產生非特異性結合的位點，達到減低背景的目的。
防止污染 。在整個雜交前處理過程中都需要戴消毒手套，實驗所用玻璃器皿及鑷子都應于實驗前一日置高溫烘烤（180℃）以達到消除RNA酶的目的。雜交前及雜交時所用的溶液均需經高壓消毒處理。
雙鏈DNA探針和靶DNA的變性 。雜交反應進行時，探針和靶核酸都必須是單鏈的。
原位雜交實驗的注意事項
更新時間：2023-09-13 
瀏覽次數：987
我的位置：