凝血酶（Thrombin）使用方法

更新時(shí)間：2024-01-23

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簡介：凝血酶（Thrombin）來源于牛血漿，分子量37KD，是由兩條肽鏈（31KD和6KD）通過二硫鍵組成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶，其催化纖維蛋白原（fibrinogen）水解掉A肽和B肽，由此形成纖維蛋白單體，單體進(jìn)一步聚合。

由于凝血酶具有切割序列專一性強(qiáng)，水解效率高的特點(diǎn)，它被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。

凝血酶是一種廣泛用于切割標(biāo)簽的蛋白酶，能夠有效切質(zhì)量比僅為1:2000的蛋白。建議消化緩沖液:20mMTris-HCl緩沖液，150mM NaCl，pH8.0，于20℃到37℃之間切割0.3到16小時(shí),1U可切割約0.1-0.5mg蛋白。

凝血酶最佳切割位點(diǎn)是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4和X3是疏水氨基酸而X1'和X2'是非酸性氨基酸，一些經(jīng)常使用的識(shí)別位點(diǎn)L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識(shí)別位點(diǎn)是X2-R[K]-X1',這里X2或者X1'是甘氨酸，例如A-R-G和G-K-A，這里切割發(fā)生在第二個(gè)殘基后。在凝血酶切割位點(diǎn)和N末端標(biāo)簽之間插入五個(gè)甘氨酸殘基可改善切，通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達(dá)到完全切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯(cuò)誤切割。凝血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。

牛凝血酶（Thrombin）

來源：牛血漿

性狀：白色或微黃色凍干粉

規(guī)格：1000U/支

保存：凍干粉4-8℃保存1年

純度：SDS-PAGE電泳純度≥95%（無蛋白酶）

比活：≥2000U/mgpr

使用方法：生理鹽水溶解使用，復(fù)溶后-20度凍存，避免反復(fù)凍融

用途：凝血酶時(shí)間檢測試劑（TT）配制、纖維蛋白原檢測試劑（FIB）配制、TB位點(diǎn)酶切、納豆激酶活力測定、尿激酶活力測定等,非臨床治療使用。