信帆生物為大家分享：炎癥因子ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞樣本勻漿的方式和方法。此方法同樣適用于生化指標(biāo)的檢測(cè)。

勻漿的方式：手工勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,反復(fù)凍融。

① 手工勻漿：在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動(dòng)勻漿3分鐘，然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測(cè)定。

② 超聲破碎:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:

a、用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎，也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復(fù)3～5次。

b、用超聲細(xì)胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復(fù)4～5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的，或者說作用力量強(qiáng)弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑，zui厲害，基本可以把細(xì)胞*破掉，DNA會(huì)釋放出來，裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對(duì)核膜破壞的作用弱，結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40，也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一，在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用（SDS基本會(huì)使蛋白變性失活）。

去垢劑屬性只是一方面，buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對(duì)酶活力的測(cè)定有一定的影響,一般不推薦用裂解液進(jìn)行裂解。

④ 反復(fù)凍融:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，反復(fù)3次左右）。

由于反復(fù)凍融對(duì)酶活力影響較大,一般不推薦使用

南京信帆生物公司主要代理產(chǎn)品：
ELISA試劑盒：進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基：微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清：胎牛血清,人血清,動(dòng)物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品：進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等。
酶免檢測(cè)服務(wù)：進(jìn)口酶免檢測(cè)服務(wù)，國(guó)產(chǎn)酶免檢測(cè)服務(wù)，進(jìn)口美國(guó)鳳凰等酶免檢測(cè)服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù)：酶免代測(cè)，WB實(shí)驗(yàn)，免疫組化代測(cè)，熒光定量PCR代測(cè)，病理細(xì)胞染色代測(cè)，生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。