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大鼠孕酮 ELISA試劑盒技術原理：

(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

(2). 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。

(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

大鼠孕酮 ELISA試劑盒操作步驟:

1、包被過程(注意設置空白對照,陰性對照):

將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發,板上應加蓋或將板平放在底部有濕紗布的金屬濕盒中)

2、封閉酶標反應孔:

5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應孔,并去除各孔中的氣泡,封閉結束后用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

洗滌方法:吸干孔內反應液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸干孔內液,傾去液體后在吸水紙上拍干

洗滌次數3次

3、加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):

檢測時一般采用1:50-1:400的稀釋度,應采用較大稀釋體積進行,一般保證樣品吸取量>20μl.

將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中,每樣品至少加雙孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

4、加入酶標抗體:

酶標抗體:根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行.37℃,30-60min之間.短于30min往往結果不穩定.每孔加100μl.洗滌同前.

5、加入底物液(現用現配):

TMB-過氧化氫尿素溶液,OPD-過氧化氫底物液系統次之.

底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色.

6、終止反應:

每孔加入終止液50μl終止反應,于20min內測定實驗結果.

7、結果判斷:

OPD顯色后采用492nm波長,TMB反應產物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首先進行空白孔系統調零.用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示,當P/N大于2時作為抗體的效價.(數值的大小依具體檢測要求而定.)

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大鼠孕酮 ELISA試劑盒經過嚴格交叉反應和干擾測試及穩定性試驗；明確的敏感度；針對所有樣品類型達到的性能；廣泛的檢測范圍可以滿足大多數檢測要求；完善的售后服務和免費的免去您的后顧之憂，