大鼠淀粉酶(ams)elisa試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

240µmol/l 5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

120µmol/l 4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

60µmol/l 3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

30µmol/l 2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

15µmol/l 1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑a50µl，再加入顯色劑b50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（od值） 。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

大鼠淀粉酶(ams)elisa試劑盒實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠淀粉酶(ams)水平。用純化的大鼠淀粉酶(ams)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入淀粉酶(ams)，再與hrp標記的淀粉酶(ams)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物tmb顯色。tmb在hrp酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的淀粉酶(ams)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（od值），通過標準曲線計算樣品中大鼠淀粉酶(ams)濃度。

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