白介素12 p35(IL-12 p35)檢測試劑盒簡介

IL-12是一由p35和p40（IL-12β）兩條鏈組成的異源二聚體，兩個亞單位通過二硫鍵連接在一起，這種結構在目前已發現的IL中所罕見。通常情況下，p40的量遠超出p70，在鼠中已觀察到p40同源二聚體的產生，是由轉染的細胞分泌的，p40同源二聚體沒有生物學活性，但它能和IL-12Rβ結合，與p70競爭性爭奪IL-12受體（IL-12R）而拮抗其生物學作用。單獨的p35不具有生物學活性，但卻是合成p70的限速因子。

IL-12受體由IL-12Rβ1和IL-12Rβ2組成，兩鏈激活JAK-STAT（連接蛋白-信號轉導子和轉錄激活子）信號轉導通路，IL-12*的細胞效應主要是由于STAT4的活化，由以下事例證明:遺傳上STAT4基因缺陷鼠和IL-p40缺陷鼠有同樣的表型。IL-12R主要由活化的T細胞、NK細胞、DC細胞和B細胞表達。

白介素12 p35(IL-12 p35)檢測試劑盒實驗條件選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

　　（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

　　（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

　　（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

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