小鼠促生長激素釋放激素（GHRH)elisa 試劑盒*，買二送一！

生長激素釋放激素（GHRH）由下丘腦弓狀核神經(jīng)元合成并釋放入垂體門脈系統(tǒng)后，與垂體生長激素細胞表面的生長激素釋放激素圖冊生長激素釋放激素受體（GHRHR）結合后,活化非選擇性離子通道,使細胞膜去極化,促進鈣離子內流和GH分泌.本藥盒利用人血清中樣品GHRH與其示蹤物125I-GHRH與特異性GHRH抗體競爭結合反應，形成125I-GHRH-GHRHAb;GHRH-GHRHAb復合物，加入（IgG）分離劑。利用分離劑分離出復合物，并測定復合物中的放射性計數(shù)。通過數(shù)據(jù)處理求出樣品中GHRH的濃度。本藥盒為定性測定，用血量少，直接加樣，操作簡便，快速。

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實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠促生長激素釋放激素（GHRH）水平。用純化的小鼠促生長激素釋放激素（GHRH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促生長激素釋放激素（GHRH），再與HRP標記的促生長激素釋放激素（GHRH）抗 體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促生長激素釋放激素（GHRH）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標 準曲線計算樣品中小鼠促生長激素釋放激素（GHRH）濃度。

操作步驟：
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
48ug/L    5 號標準品    150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
24ug/L    4 號標準品    150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
12ug/L    3 號標準品    150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
6ug/L    2 號標準品    150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
3ug/L    1 號標準品    150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

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4.配液：將 2 0 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 2 0 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
 重復 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
     10 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

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