丙酮酸脫氫酶活性檢測試劑盒新品上市！

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：110mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：1mL×1 支，-20℃避光保存；
試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1 支，4℃保存；
試劑五：粉劑×1 支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前加入 1mL 蒸餾水
試劑七：粉劑×1 支，4℃保存；
工作液的配制：臨用前把試劑四、試劑五、0.5mL 試劑六和試劑七轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解待用。

產(chǎn)品說明：
PDH（EC 4.1.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)
催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。
PDH 催化丙酮酸脫氫，同時還原 2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），從而導(dǎo)致 605nm 光吸收的減少。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和
蒸餾水。

操作步驟：
一、PDH 的提取
準(zhǔn)確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑二，用冰浴勻漿器或研缽
勻漿充分研磨，4 ℃ 11000 g 離心 10min，取上清，置冰上待測。

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二、測定步驟
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 605nm，蒸餾水調(diào)零。
2、每個樣本需要 180μL 工作液，按樣本數(shù)取出一定量的工作液置于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其
它物種）水浴 10min。
3、空白管：在微量比色皿或 96 孔板中加入 180μL 工作液和 10μL 水，混勻，立即記錄 605nm 處初
始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2，計算ΔA=A1-A2。
4、測定管：在微量比色皿或 96 孔板中加入 180μL 工作液和 10μL 樣本，混勻，立即記錄 605nm 處
初始吸光值 A3 和 1min 后的吸光值 A4，計算ΔA=A3-A4。

三、PDH 活性計算

a.用微量比色皿測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH 活性（U/mg prot）＝[(ΔA 測定-ΔA 空白)÷（ε×d）×V 反總×10
9]÷(Cpr×V 樣) ÷T
=904.762×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH 活性（U/g 鮮重）＝[(ΔA 測定-ΔA 空白)÷（ε×d）×V 反總×10
9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T
=913.81×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷W

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單
位。
PDH 活性（U/mg prot）＝[(ΔA 測定-ΔA 空白)×V 反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T
=1809.524×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
PDH 活性（U/g 鮮重）＝[(ΔA 測定-ΔA 空白)×V 反總÷（ε×d）×10
9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T
=1827.62×(ΔA 測定-ΔA 空白)÷W

注意事項：

1、測定過程中所有樣本在冰上放置，以免變性和失活。
2、測定管的ΔA 值在 0.01-0.25 之間，若測定管的ΔA 值大于 0.25，需將樣本進行稀釋。

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