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辣根過氧化物酶 HRP主要用途是什么!

更新時間:2019-10-15      瀏覽次數:3083

辣根過氧化物酶 HRP主要用途是什么!

 

說明:POD是一種具有氧化還原酶性質的血紅素蛋白。用于生化研究,是酶標記法所用的一種主要酶。也用于生物液體中 葡萄糖和半乳糖的測定。

 

溶解性 10 mg/mL in water
來源 From horseradish
CAS 9003-99-0
儲存條件 -20℃
酶活/效價 233-300units/mg.solid
外觀(性狀) 褐色結晶性凍干粉狀 

 

HRP是一種分子量達44 000的糖蛋白,由無色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉結合而成,中性糖和氨基糖約占18%,主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一個HRP分子中含一個氯化血紅素IX作輔基,該輔基在403nm波長處有大吸收峰,而去輔基的酶蛋白在275nm波長處有大吸收。HRP在403nm的OD值與275nm的OD值之比,也就是所謂的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值僅說明血紅素基團在HRP中的含量,并非表示HRP制劑的真正純度,而且RZ值高的HRP制劑,并不意味著酶活性也高。

 

但可以一純酶溶液在10mm光徑403nm波長下的吸光度來計算酶濃度[1%(W/V)酶溶液吸光度為22.5,濃度為227umol/L]。HRP干燥貯存于–20oC可保持穩定,使用1.36 mol/L甘油、10mmol/L磷酸鈉、30umol/L牛血清白蛋白和20umol/L細胞色素C(pH 7.4)溶液作為基質冷凍保存,可使酶結合物穩定數年。HRP對熱及有機溶劑的作用比較穩定,用甲苯與石蠟切片處理或用純乙醇或l0%甲醛水溶液固定做冷凍切片,均不能使其活性改變。

 

qing化物或硫化物在10–5~10–6mol/L濃度時具有可逆性地抑制HRP的作用;氟化物、疊氮化合物或羥胺僅在高于10-3mol/L濃度時抑制HRP;HRP還可被羥甲基過氧化氫不可逆地抑制。強酸也是HRP的強烈的抑制劑。

 

HRP之所以是迄今為止在ELISA中應用為廣泛的標記用酶,主要是因為其一方面易于提取,價格相對低廉;另一方面性質穩定,耐熱及有機溶劑的作用,與抗原或抗體偶聯后,活性很少受損失。

 

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