酶聯(lián)免疫分析實(shí)驗(yàn)中遇到這些問題怎么辦?


1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。


這一方法的基本原理是：
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。


我們正常會在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)各種問題，如果能提前知道一些關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)的要領(lǐng)就可以正確的避免這些問題的出現(xiàn)，今天信帆生物就為各位老師總結(jié)了十個關(guān)于ELISA實(shí)驗(yàn)中需要注意的問題： 

1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。但需要有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。 

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。 

3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。 

4、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時，要使底物避光保存。 

5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。 

6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。 

7、將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。 

8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。 

9、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。 

10、ELISA試劑盒對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。


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酶聯(lián)免疫分析實(shí)驗(yàn)中遇到這些問題怎么辦?