Dispase中性蛋白酶

Dispase中文名稱為中性蛋白酶，也稱為分散酶，是一種非特異性的金屬蛋白酶，被用來從各種不同組織或器官中消化細胞外基質，釋放并制備原代單細胞；或用于細胞培養中的細胞收獲或接種轉移；也被用于防止懸浮細胞培養時的細胞意外結團。

蛋白水解酶類，如胰蛋白酶、膠原酶和鏈酶蛋白酶都被用語來分散組織、分類細胞，但他們常傷害細胞，并且在培養時不穩定，甚至可能引入支原體污染。Dispase就沒有這個問題，不會給細胞膜帶來傷害，而且因為其來自細菌，故不會引入支原體或任何動物病毒；溫度、pH、血清成分等的差異對Dispase影響很小。Dispase經稀釋后其活性就大大降低，這也方便了后續的培養。Dispase甚至被加入細胞培養懸液中用于防止細胞團結。

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優勢：

該酶已被證實作用迅速有效又溫和；

細胞能保持完整，細胞膜無損；

該酶非哺乳動物來源，不含支原體或動物病毒污染；

對于溫度、pH的改變、以及血清成分都很穩定；

使用螯合劑或稀釋就能簡單滅活；

酶活定義：

1U是在檢測條件下1分釋放相當于1 umol酪氨酸的Folin陽性氨基酸或肽的酶量；DispaseII：≥0.8 U (37℃，使用酪蛋白作為底物，pH 7.5)；1U Dispase II基本相當于600U日本單位的Dispase。

抑制劑： EDTA、EGTA、Hg2+、其他重金屬。血清不會抑制酶活性。

使用方法：

用Hepes-buffered saline (50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase至10 mg/ml，使用時用細胞培養液稀釋到0.6-2.4 U/ml。不推薦高于2.4 U/ml的 工作濃度，可用0.22 um的無菌濾膜過濾除菌。

保存方法：

保存在2-8℃；配成溶液后，在2-8℃ 2周內使用有效，在-20°2個月內使用有效；不要反復凍融；儲存液用Hepes鹽緩沖液稀釋后，2-8℃，3天內使用有效。