香菇提取物的分離提取

香菇多糖又稱香蕈、椎耳、香信、冬菰、厚菇、花菇,英文名:Lentinan。香菇是我國傳統的著名食用菌,在世早人工馴化栽培。香菇營養豐富,味道鮮美,被視為“菇中"。其中含有十多種氨基酸,其中有異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、纈氨酸等7種人體必需的氨基酸,還含有維生素B1、B2、PP及礦物鹽。

香菇多糖的分離提取：

1、實驗目的 掌握水溶醇沉法分離多糖類化合物的原理和方法。

2、實驗原理 在組織中,多糖多與蛋白質以共價相結合,所以在生化產品制備工藝中,往往第一步多用酶降解蛋白質部分或用堿使多糖—蛋白質間的鍵裂開,以促進多糖在提取時的溶解。堿性提取可避免多糖中硫酸基團水解而破壞。現多采用堿性提取的同時用蛋白質水解酶處理組織。提取液中存在的蛋白質可用普通蛋白質沉淀劑使之沉淀,也可用其他方法使變性沉淀,如適當調pH和加熱等。 苯酚試劑可與香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起顯色反應,生成橙黃色化舍櫥,于49Ohm處比色,定量。 

3、實驗材料 實驗器材 循環水式真空泵;旋轉蒸發儀;粉碎機;恒溫水浴鍋;紗布;搪瓷缸;真空干燥器;721型分光光度計;15ml具塞試管。 實驗試劑 (1)95%乙醇;甲醇(化學純);乙mi(化學純);木瓜蛋白酶(中性);纖維素 酶;0.2 mol/L十六烷基三甲基氫氧化銨水溶液;10 mol/L 氫氧化鈉溶液;葡萄糖標準溶液(1mg/ml,10m/m]);苯酚試液。 (2)復合酶液:以PBS緩沖液做溶劑,其中蛋白水解酶濃度為8 %,纖維素酶濃度為4%; (3)苯酚溶液:稱取苯酚(AR級)10 g加水190 g溶解后,置于棕色瓶,備用。 

4.實驗方法步驟 

(一)香菇多糖的分離：

1、預處理:取干香菇4 g,用粉碎機粉碎或搗碎。 

2、提取:將搗碎的干香菇置于250 ml三角瓶中,在攪拌的條件下加7倍量水混勻, 加熱至90℃,攪拌保溫60 min,降溫至40℃時轉移到40℃水浴保溫;并加入適量0.45 ml 復合酶(蛋白水解酶濃度為8 %,纖維素酶濃度為4%),pH值為自然(pH 6.4),攪拌反應60 min,然后迅速升溫到90-100 ℃,滅活1min,降溫后紗布過濾,收集濾液。 

3、濃縮:將以上濾液置于旋轉蒸發儀中,然后減壓濃縮至l/5體積時,停止濃縮。 

4、沉淀:將濃縮液置于搪瓷缸中,在攪拌的條件下,加1 倍量乙醇,然后靜置過夜。過濾得沉淀物,濾液再加3倍量乙醇,得沉淀物。 

5、干燥:將沉淀置真空干燥器干燥,即為香菇多糖。