RNA提取逆轉(zhuǎn)錄

服務(wù)介紹：

細(xì)胞中的RNA可分為信使RNA、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA和核糖體RNA三大類，不同組織總RNA提取實(shí)質(zhì)就是將細(xì)胞裂解，釋放出RNA，并通過不同方式去除蛋白、DNA等雜質(zhì)，最終獲得高純RNA產(chǎn)物的過程。再在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，隨機(jī)引物、oligo(dT)或基因特異性引物的引導(dǎo)下合成互補(bǔ)的DNA (complementary DNA，cDNA)。

實(shí)驗(yàn)流程：

取材-RNA提取-測(cè)濃度-逆轉(zhuǎn)錄成cDNA 

其中mRNA、lncRNA、circRNA為普通逆轉(zhuǎn)錄；

miRNA采取特異性逆轉(zhuǎn)錄(需提供基因名稱和種屬，方便設(shè)計(jì)引物用于特異性逆轉(zhuǎn)錄 )，默認(rèn)做莖環(huán)法的逆轉(zhuǎn)錄，如需做加尾法逆轉(zhuǎn)錄請(qǐng)?zhí)貏e備注說明。

送樣運(yùn)輸要求：

1. 樣品處理

a) 動(dòng)物組織：常規(guī)組織100mg，脂肪組織，結(jié)締組織，纖維化組織適當(dāng)增加。將組織剪切成合適大小后（建議組織塊長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm），然后迅速完全浸泡于5～10倍體積的RNAsolid™試劑中。（注意：已浸入RNAsolid^TM試劑中的組織經(jīng)平衡一段時(shí)間后，可從溶液中取出，切成更小的組織塊，再重新放回RNAsolid^TM試劑中；有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等，不適合用RNAsolid^TM試劑進(jìn)行RNA保護(hù)。）

b) 植物組織：新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大小（建議長(zhǎng)寬高均不大于0.5 cm）后，然后迅速完全浸泡于5～10倍體積的RNAsolid^TM試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障，如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolid^TM試劑的滲透，對(duì)于此類組織，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。）

c) 細(xì)胞等樣本：收集不少于10^6個(gè)細(xì)胞沉淀（用PBS清洗1-2次），干冰運(yùn)輸。

d) 酵母、細(xì)菌等樣本：離心棄上清，收集一定量的菌體沉淀，干冰運(yùn)輸。

e)全血：最少1 mL新鮮血液EDTA抗凝管，干冰運(yùn)輸。

f)血清或血漿：最少1 mL，干冰運(yùn)輸。

g)RNA樣品： OD260/280為1.8-2.0，濃度≥100 ng/μL，體積≥20μL，干冰運(yùn)輸。

2. 樣品保存及運(yùn)輸

加入有RNAsolid^TM試劑的樣本可在37℃保存1～2天，2天以后部分組織中的RNA會(huì)開始降解。室溫（25℃）穩(wěn)定保存1周，不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolid^TM試劑中，4℃條件下可穩(wěn)定保存1個(gè)月，不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生。長(zhǎng)期存放可先將保存在RNAsolid^TM試劑中的樣本4℃浸透過夜，然后將RNAsolid^TM試劑吸出棄去，再將樣本放入-20℃或-80℃長(zhǎng)期穩(wěn)定保存3～5年。